幾種蛋白質(zhì)含量測(cè)量方法比較

更新時(shí)間：2010-08-31 點(diǎn)擊次數(shù)：4060

幾種蛋白質(zhì)含量測(cè)量方法比較

蛋白質(zhì)含量測(cè)定一直是生物化學(xué)中zui常用、zui基本的分析方法之一。蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，沒有蛋白質(zhì)就沒有生命。機(jī)體每個(gè)系統(tǒng)都有蛋白質(zhì)的參與，蛋白質(zhì)占人體重量的16.3%。人體的蛋白質(zhì)主要來源于食物：豆制品、肉類或者奶粉等副食品。既然蛋白質(zhì)都來自于食物，那么測(cè)定食物中的蛋白質(zhì)含量就變得很有必要。

蛋白質(zhì)含量測(cè)定有好多種方法，歸納起來為：凱氏定氮法、雙縮尿法、Folin酚試劑法、紫外吸收法和考馬斯亮藍(lán)法。不同的方法，原理、步驟和實(shí)驗(yàn)試劑都各不相同，但是一直以來，凱氏定氮法zui為經(jīng)典，使用。近幾年，根據(jù)蛋白質(zhì)測(cè)定的凱氏定氮法，很多廠家已研制出了相應(yīng)的儀器，如：蛋白質(zhì)測(cè)定儀。蛋白質(zhì)測(cè)定儀測(cè)出的蛋白質(zhì)含量，包括其他非蛋白含氮化合物，如游離氨基酸、尿素等物質(zhì)，因此該儀器有時(shí)又被叫做粗蛋白測(cè)定儀。

下面我們列表來對(duì)各種蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法進(jìn)行比較。

方法	靈敏度	時(shí)間	原理	干擾物質(zhì)	說明
凱氏定氮法	靈敏度低，使用于0.2-1.0mg氮，誤差為±2%	費(fèi)時(shí)，8-10小時(shí)，但如果采用凱氏定氮儀，縮短時(shí)間至4個(gè)小時(shí)	將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨氣，然后用酸吸收滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離）	用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測(cè)定，干擾少，如果采用凱氏定氮儀，就會(huì)大大縮短定氮時(shí)間
雙縮尿法	靈敏度低，1-20mg	中速20-30分鐘	多肽鍵+堿性Cu2+紫色絡(luò)合物	硫酸銨：Tris緩沖液，某些氨基酸	用于快速測(cè)定，但不靈敏，不同蛋白質(zhì)顯色相似
Folin酚試劑法	靈敏度高，<5微克	慢速40-60分鐘	雙縮尿反應(yīng)，磷鉬酸-磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原	硫酸銨，Tris緩沖液，甘氨酸，各種硫醇	耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)；操作要嚴(yán)格計(jì)時(shí)；顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化
紫外吸收法	較為靈敏，50-100微克	快速5-10分鐘	蛋白質(zhì)中的絡(luò)氨酸和色氨酸殘基在280nm處德光吸收	各種嘌呤和各種核苷酸	用于層析柱流出液的檢測(cè)，核酸的吸收可以校正
考馬斯亮藍(lán)法	靈敏度zui高，1-5微克	快速5-15分鐘	考馬斯亮藍(lán)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，其λmax由465nm變?yōu)?/span>595nm	強(qiáng)堿性緩沖液，TritonX-100SDS	的方法，干擾物質(zhì)少，顏色穩(wěn)定，顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化

由上表可知，考馬斯亮藍(lán)法和Folin酚試劑法靈敏度zui高，比紫外吸收方法高10-20倍。凱氏定氮法雖然比較復(fù)雜，但是度較高，因此作物蛋白質(zhì)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法，而蛋白質(zhì)測(cè)定儀的發(fā)明，更是推動(dòng)了凱氏定氮法的發(fā)展。我們?cè)谶x擇何種方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)，應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況，從下面幾個(gè)點(diǎn)考慮：1.實(shí)驗(yàn)堆測(cè)定所要求的靈敏度和度。2.蛋白質(zhì)的性質(zhì)3.溶液中存在的干擾物4.測(cè)定時(shí)間。從以上四個(gè)方面綜合考慮，zui后選擇zui合適的測(cè)定方法。